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綠色無公害農產品的標準
更新時間: 2015-09-23 00:00    

1、主題內容與適用范圍 

本標準規定了食用菌中粗蛋白質含量的測定方法。 

本標準適用于食用菌中粗蛋白質含量的測定。 

2、引用標準 

GB 12530 食用菌取樣方法 

GB 12531 食用菌水分測定 

3、方法提要或原理 

采用半微量凱氏定氮法,即在加速劑存在下,以硫酸破壞樣品中有機物,加堿蒸餾,滴定所釋放的氨,計算出其含氮量。含氮量乘上換算系數6.25即得樣品的粗蛋白質量。菇類可消化蛋白質是粗蛋白的70%左右,含氮量乘上4.38,即為可消化蛋白質的含量。 

4、試劑 

分析中,除另有說明,均限用分析純試劑、蒸餾水或相當純度的水。  

4.1 硫酸(GB 625):分析純或化學純,密度1.84g/mL 

4.2 鹽酸(GB 622):密度1.18g/mL 

4.3 氫氧化鈉溶液:濃度400g/L,用分析純或化學純氫氧化鈉(GB 629)配制。  

4.4 硼酸(GB 628)溶液:濃度20g/L,為蒸餾時的吸收液。  

4.5 加速劑:將600g硫酸鉀(HG 3920)100g五水合硫酸銅(GB 665 CuSO4·5H2O)混勻,充分研磨后過40目篩,試劑瓶內密封保存。 

4.6 鹽酸標準溶液:濃度0.05mol/L0.1mol/L,用無水碳酸鈉或鄰苯二甲酸氫鉀標定其濃度,精確到小數點后第四位。  

4.7 甲基紅-溴甲酚綠混合指示劑:50mL濃度為2g/L的溴甲酚綠(HG 31220) 95%乙醇(GB 679)溶液和10mL濃度為2g/L的甲基紅(HG 3958)95%乙醇溶液混合。 

5、儀器、設備  

5.1 電熱鼓風干燥箱。  

5.2 小型植物粉碎機:備有1mm孔徑的金屬篩網。  

5.3 分樣篩:備有孔徑0.42mm(40)和孔徑0.84mm(20)篩子。  

5.4 玻璃研缽:備有研杵。  

5.5 廣口瓶:帶磨口。  

5.6 剪刀和小刀。  

5.7 分析天平:感量0.0001g  

5.8 扭力天平。  

5.9 可調電爐:0600  

5.10 通風櫥。  

5.11 消煮架:鐵制,可使凱氏瓶在消煮時與垂直方向成30°~45°角。  

5.12 硬質凱氏瓶:容積100mL  

5.13 半微量凱氏定氮蒸餾裝置。  

5.14 半微量滴定管:10mL  

5.15 彎頸三角漏斗:直徑25mm  

5.16 錐形瓶:250mL 

6、樣品  

6.1 取樣方法和數量 

6.1.1 干制品(蘑菇干片、干香菇、黑木耳和銀耳等)GB 12530中規定要求進行。總量不得少于100g 

6.1.2 鮮菇在每批不同的地方隨機取樣作為原始樣品,總量不得少于1000g  

6.2 試樣的制備 

6.2.1 干品直接用剪刀剪成小塊,在80100干燥箱中烘至發脆后冷卻,立即用小型植物粉碎機粉碎。棄去開始粉碎出的樣品(約占總樣十分之一)。粉碎過的樣品均需過40目篩。未能過篩部分再次粉碎或經研缽內研磨之后再過篩,直至全部樣品過篩為止。銀耳和木耳樣品因質地關系經粉碎后大部分樣品不能過40目篩,故要求全部樣品過20目篩,過篩后的樣品裝入清潔的廣口瓶內保存備用。樣品密封后填寫標簽,注明品名、日期、交樣單位和取樣人等。 

6.2.2 鮮菇取樣后立即切成4mm厚度的菇片,鮮耳則用手撕成小塊均勻地攤在干燥箱內墊有紗布的鐵絲網上,50鼓風干燥6h以上。待樣品半干后再逐步提高溫度至80100。樣品發脆之后冷卻,立即用粉碎機粉碎。其他操作同干品。

7、分析步驟  

7.1 稱樣:稱取試樣0.30.5g(蘑菇、香菇、草菇和平菇等高蛋白質的樣品為0.3g,木耳、銀耳和茯苓等低蛋白質含量的樣品則為0.5g),精確到0.0001g。同時按GB 12531中規定的方法稱樣測定試樣的含水量。  

7.2 消煮:試樣無損地倒入凱氏瓶中,加入加速劑粉末(4.5)3.5g,混勻,最后加入濃硫酸(4.1)5mL,輕輕搖動凱氏瓶使試樣完全濕潤。消煮時利用消煮架將凱氏瓶斜放在電爐上加熱。瓶口加彎頸三角漏斗。開始時緩慢地加熱,待瓶內硫酸液沸騰后,調節電爐溫度,防止泡沫沖到凱氏瓶頸上。經常旋轉凱氏瓶,直至有機物完全炭化、泡沫消失為止。隨后用猛火加熱,使溶液不斷處于沸騰狀態。溶液變清呈綠色之后繼續加熱0.5h后結束。整個過程在通風櫥內進行。  

7.3 蒸餾:裝好半微量定氮蒸餾裝置。使用前用蒸餾水沖洗干凈。在蒸氣發生瓶內加入2/33/4容積的蒸餾水。將冷凝管下端插入盛有10mL硼酸吸收液(4.4)250mL錐形瓶液面下,吸收液中預先加入56滴混合指示劑(4.7)。通電加熱,待蒸氣產生后開始蒸餾。從加樣口將凱氏瓶中消煮好的樣品液倒入,并用蒸餾水沖洗凱氏瓶數次,確保樣品全部加入。立即加入氫氧化鈉溶液(4.3)20mL,使樣品溶液呈強咸性。加樣口蓋塞封閉,通入蒸氣,使反應室內蒸餾液猛烈沸騰,釋入出的氨被吸收液所吸收,待吸收液開始變綠色之后繼續蒸餾56min,吸收液總量達100mL左右時停止蒸餾。

7.4 滴定:取出吸收瓶,用鹽酸標準液(4.6)將吸收液由藍綠色滴定至灰紫色為終點。  

7.5 空白試驗:不加試樣的加速劑和濃硫酸作為空白樣品,按上述步驟同時進行測定。空白試驗所消耗的鹽酸標準溶液體積須小于0.25mL 

8、分析結果的計算  

8.1 計算 粗蛋白質(干基,%)=〔c(V2-V1)×0.014×6.25/m(1-X)〕×100

式中:c── 鹽酸標準溶液的濃度,mol/L 

V1── 空白試驗滴定消耗的鹽酸標準溶液體積,mL 

V2── 樣品滴定消耗的鹽酸標準溶液體積,mL 

m── 樣品的質量,g 

0.014── 氮的摩爾質量,g/m mol 

X── 樣品含水量,%; 

6.25── 氮換算成粗蛋白質的系數。  

8.2 允許差 

取平行測定結果的算術平均值為測定結果,保留小數后一位。 

平行測定結果的絕對差值不大于0.2%。 

二級小圖